成像技术

最大化显微镜视野

介绍

显微镜视野(FOV)是通过显微镜目镜(目镜FOV)或科学相机(相机FOV)观看时可见的最大区域,通常报告为直径测量值(图1)。 使FOV最大化对于许多应用而言是可取的,因为增加的吞吐量能收集更多的数据,从而为检测细微效果提供了更好的统计测量,还减少了使用显微镜的时间。

最大化显微镜视野
图1:以直径测量的显微镜视野

显微镜的FOV最终受到许多因素的限制,例如物镜,显微镜内部光学系统的镜筒直径,目镜,科学的相机传感器尺寸以及相机安装适配器

通常可以通过参考目镜和某些物镜上显示的视场数(FN)来找到显微镜的最大FOV。视场数只是以物镜或目镜的直径(毫米)为单位测量的最大FOV,因此,视场数为18的物镜的最大FOV为18 mm。但是,视场数始终不假定放大倍数,因此要计算实际FOV,应将视场数除以物镜放大倍数:

视场 = 视场数÷对象放大率

视野数为18的20倍物镜实际上的FOV为0.9毫米。同样,场数为18的100x物镜的FOV为0.18 mm。物体放大得越多,视野将越小。因此,在寻求提高FOV时,应始终首先考虑是否可以减小放大倍数(图2)。图2:随着放大倍率的减小而缩小。刻度线的可见长度在20倍放大倍数下约为〜0.6 mm,但在50倍下约为0.25 mm,在100倍下仅为〜0.12 mm。

最大化显微镜视野
图2:随着放大倍率的减小而缩小。刻度线的可见长度在20倍放大倍数下约为〜0.6 mm,但在50倍下约为0.25 mm,在100倍下仅为〜0.12 mm。

匹配科学相机的FOV与显微镜的FOV

当使用目镜时,使用视场数计算显微镜的FOV效果很好,但是当使用科学相机成像时,效果不佳。像大多数数字相机一样,科学相机也使用方形或矩形传感器。这意味着科学相机无法捕获显微镜能够捕获的整个圆形FOV。取而代之的是,摄像机的FOV必须安装在显微镜的FOV内部(图3)。

相机规格表会将相机视场显示为对角线尺寸(通常以毫米为单位)。理想情况下,相机FOV对角应与显微镜FOV的直径匹配,以捕获尽可能多的可用图像。但是,这确实意味着相机的水平和垂直FOV将小于显微镜的直径。

可以使用对角视场大于显微镜的相机来捕获整个显微镜的视场(图4)。但是,这并不是最佳选择,因为在图像的各个角落会出现大量的渐晕。理想情况下,在选择科学相机时,它的对角视场应与将要使用的显微镜​​的规格相匹配。图3:对角线视野为18毫米的科学相机非常适合18毫米显微镜视野。 相机传感器的x和y侧尺寸为12.7 mm,以允许该对角FOV。

图3:对角线视野为18毫米的科学相机非常适合18毫米显微镜视野。 相机传感器的x和y侧尺寸为12.7 mm,以允许该对角FOV。 图4:相机传感器对角FOV大于显微镜FOV的会在图像的各个角落显示出明显的渐晕。

将适配器FOV匹配至相机和显微镜FOV

连接科学相机到显微镜的相机端口,需要一个显微镜的C-mount或F-mount适配器。适配器的安装螺纹是标准化的,这意味着C-mount适配器可以连接到所有C-mount接口的科学相机。但是,适配器是显微镜特定的,这意味着尽管任何C-mount相机都可以连接到C-mount适配器,但适配器仅适合匹配品牌的显微镜。

适配器中可以有镜头,以在图像到达相机之前对其进行放大或缩小。这可以用来更好地将相机的视野与显微镜的视野匹配。例如,如果相机的对角视野为11毫米,而显微镜的视野为18毫米,则0.67倍的适配器将缩小图像并将其显示在11毫米的照相机上。但是,FOV的增加是以降低分辨率为代价的。

如果目标只是将相机连接到显微镜,可以使用1x的适配器,它不包含其他镜头,不提供其他放大或缩小倍数。这通常是首选方法,因为它不会在系统中引入其他镜头。每个额外的镜头都会使到达相机的光子数量减少3-4%,因此许多研究人员尽量避免这种情况。

适配器也可能会影响显微镜和相机的FOV,具体取决于所用适配器的类型。 C型适配器是最流行的显微镜相机适配器,最大FOV限制为22毫米。 F型适配器是一种较大格式的适配器,能够达到> 30 mm FOV。

可以利用F-mount的大面积FOV显微镜和科学相机的开发是相对较新的-在撰写本文时,仅存在一台商用25毫米显微镜。大多数现代显微镜的FOV为19毫米或22毫米,因此仍然可以使用C-mount。最大规格的转盘共聚焦系统FOV也限于22mm。

选择相机以最大化显微镜视野

在Teledyne Photometrics,我们的目标是制造能够与所有现代显微镜FOV最佳匹配的相机(表1)。 因此,Prime 95B系列包括19毫米相机,22毫米相机和25毫米相机。 此外,Prime BSI和Iris 9都适合19毫米显微镜FOV,而Iris 15则适合25毫米显微镜FOV。 Kinetix是我们最大的格式传感器,可用于从高达29 mm的任何系统中获得最大FOV。表1:Teledyne Photometrics相机经过优化,可匹配任何显微镜,最大可达29 mm。

最大化显微镜视野
表1:Teledyne Photometrics相机经过优化,可匹配任何显微镜,最大可达29 mm。

通过认识到FOV要求可能非常多变,我们能够更好地满足客户的需求,并提供广泛的相机FOV选项。

总结

显微镜的最大视野受到物镜,显微镜内部光学系统的镜筒直径,目镜,科学的相机传感器尺寸以及相机安装适配器的影响。 为了获得最佳的成像性能,最好将显微镜的视野与科学相机的视野相匹配,以捕获尽可能多的信息并避免渐晕。 Teledyne Photometrics相机的设计符合这些规格,以提供最大的视野。

以上内容原文摘自https://www.photometrics.com ,由子健电子(上海)有限公司翻译整理, 转载请注明。

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