显微技术

即使是经验丰富的显微镜专家，无论他们使用的是传统的摄影胶片乳剂还是较新的固态数字相机系统，在光学显微镜中获取准确的色彩平衡图像都可能是一个挑战。 电子图像捕获技术的使用与传统的基于胶片的显微照相一样依赖于相同的光属性，但是执行白平衡调整以实现色彩平衡的功能是电子图像传感器的独特功能，对于从显微镜捕获数字图像的研究人员来说根本不直观。 图1-3200K和5500k照明下的白平衡校正 当将捕获的数字图…

介绍 荧光显微镜中的分辨率定义为样品上两点之间仍可区分的最短距离。这主要由两个因素决定；显微镜分辨率是显微镜可以分辨的最小物体，而相机分辨率是相机检测显微镜可以分辨的物体的能力。 显微镜的最大分辨率是物镜数值孔径和样品发射波长的函数，而相机分辨率则完全由像素大小决定。 但是，荧光显微镜的分辨能力最终受到光的衍射极限的限制，例如，当使用绿光（510 nm）时，其衍射极限约为220 nm。这为可以分辨…

 光学显微镜的分辨率定义为标本上两点之间的最短距离，观察者或相机系统仍可将其区分为单独的实体。下图（图1）给出了这个重要概念的一个示例，其中来自标本的点光源在显微镜中间像平面上显示为艾里衍射图。 图1-艾里斑和分辨率极限 显微镜物镜分辨率的极限是指其在衍射图中区分两个紧密排列的艾里斑的能力（图中未标出）。中间像平面附近的衍射图的三维表示被称为点扩散函数，在图1的下部示出。标本图像由一系列…

数值孔径（也称为物侧孔径）是最初由Abbe为显微镜物镜和聚光镜定义的值（通常由缩写NA表示）。它由简单的表达式给出： 数值孔径(NA)= n × sin(μ)或n × sin(α) 注意：许多作者使用变量µ来指定一半的角孔径，而另一些作者则使用更常用的术语α，在某些情况下使用θ。 在数值孔径方程中，n表示物镜前透镜与样品之间介质的折射率，μ或α是物镜的二分之一角孔径。 图1-数值孔径 显微镜物镜的…

考虑光学显微镜的分辨率时，大部分重点放在垂直于光轴的平面中的点对点横向分辨率（图1）。分辨率的另一个重要方面是物镜的轴向（或纵向）分辨能力，该能力是平行于光轴测量的，通常被称为景深。 图1-景深范围 像水平分辨率一样，轴向分辨率仅由物镜的数值孔径决定（图2），目镜仅放大分解的细节并投影到中间像平面中。就像在经典摄影中一样，景深由从最近对焦的物体平面到同时对焦的最远平面的距离决定。在显微镜下，景深非…

通常，很容易识别单个物镜的属性，因为重要的参数通常刻在物镜本身的外壳（或镜筒）上，如图1所示。该图描绘了典型的60倍平场消色差物镜，其中包括常见的雕刻。 确定物镜设计目的所需的所有规格以及正确使用的必要条件。 显微镜制造商提供多种物镜设计，以满足专门成像方法的性能需求，以补偿盖玻片的厚度变化，并增加物镜的有效工作距离。通常，仅通过查看物镜的构造无法了解特定目标的功能。有限的显微镜物镜旨在将衍射极限…

在显微成像系统中，常常会用分辨率来评价其成像能力的好坏。这里的分辨率通常是指光学系统的极限分辨率以及成像探测器的图像分辨率。最终图像所呈现出的实际分辨率，取决于二者的综合影响。过高的光学分辨率如果没有足够精细的图像分辨率来体现，则实际分辨率会降低到图像分辨率以下；如果相机解析能力过高但光学系统的分辨率低，同样也看不清物体的精细结构。所以在选择相机的时候，我们也不妨根据自己这套系统需要达到的分辨率来…

一，明场(Bright field BF) 明场镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。 二，暗场 (Dark field DF) 暗场实际是暗场照明法。它的特点和明场不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。暗场的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直…

显微镜是一种光学仪器，主要用于将物体成像反射到人眼或视频设备。最早的显微镜是由两个组件制作而成的简单显微镜，将肉眼所看不见的物体放大成像。在整个显微镜历史中，其设计已从简单的两个组件发展成为由多个透镜、滤光片、偏振片、 分光器、传感器、照明源，以及一系列其他组件的组合构成的精密显微镜。要深入了解这些复杂光学仪器，就必须先了解显微镜的组件、主要概念和规格及其应用。 显微镜组件 复合式显微镜是由多个透…

相机的作用就是将显微镜光路所放大的像拍摄并在显示器上显示出来。在显微镜领域有一个专业术语叫做视场数Field Number（简称FN），用来表征显微镜所成像平面（是一个圆形区域）的直径，这个像通过显微镜和相机之间的中继镜筒后会直接投射在相机的芯片上从而成像。而常规的相机芯片都是矩形，这样在实际成像的时候让这两个形状匹配就会有两种方案： 方案一：获得最大的成像视野 这种方案为了得到显微镜镜下的所有图…