常见问题

如何选择合适的显微镜物镜?

如何选择合适的显微镜物镜?
如何选择合适的显微镜物镜?

物镜可能是光学显微镜中最重要的部分,因为它负责原始图像的形成,并在确定图像质量中起着核心作用。
但是,由于显微镜物镜类型众多,因此很难为您的应用找到合适的物镜类型。从哪里开始?

今天我们整理了一系列问题,以帮助您权衡选择并为您的应用选择正确的物镜。让我们潜入。

1.您的标本是多大?

奥林巴斯的显微镜物镜有从1.25倍至150倍的放大倍率范围。放大倍率是为您的应用找到最佳物镜时要考虑的第一个参数。结合目镜的放大倍率,就可以确定显微镜的整体放大倍率。

2.您要观察的标本中最小的特征是什么?

显微镜物镜的第二个最重要的参数是数值孔径(NA)。NA衡量其收集光的能力。这是确定分辨率,焦点深度和图像亮度的重要因素。具有较大NA的物镜会收集更广范围的光线,从而生成更明亮,更高分辨率的图像。
NA对于观察非常精细的结构或在荧光观察过程中检测暗信号也很重要。在确定哪个显微镜物镜将解析样品中的最小特征时,请考虑NA。在权衡选择时,请记住数值孔径范围在0.04到1.7之间。

3.您对图像的视野和景深有什么要求?

显微镜的两个重要物镜特征是视场数和景深。

  • 视场数,或场数,是视场(视野)在光学显微镜的直径。它以毫米表示,并在中间像平面(Intermediate Image Plane)测量。请记住,现代平场复消色差透镜和其他专门的平场物镜通常具有22到26.5毫米(或与广角目镜结合使用时更大)范围内的可用视场。
  • 物镜的景深是轴向范围,使您可以聚焦物体而图像锐利度不会发生任何明显变化。数值孔径从低数值孔径物镜到高数值孔径物镜都有很大变化。通常随着数值孔径的增加而减小。

4.您的分辨率要求是什么?

显微镜物镜的分辨率决定了可以观察到的两个物体之间的最小距离。它与光的照射波长成正比,与NA成反比。

NA越高,两个物体之间的距离越小。如前所述,为您的应用选择合适的NA对于确定显微镜系统的分辨率至关重要。

5.您需要什么工作距离?

工作距离(WD)是样品聚焦时从物镜前透镜到盖玻片最近表面的距离。WD与NA成反比,这意味着较高的NA物镜通常具有较小的工作距离。

如果您的应用要求无盖玻片,这些应用需要焦平面与物镜尖端之间的距离增加(例如,具有不规则形貌,精细结构或整个光学组件的机械约束的样品),那么您可能会发现Olympus的LMPLFLN或SLMPLN长距离目标非常适合您的应用。

6.如果您有荧光样品,您的荧光信号有多亮?

如果您处理的样品发出的荧光信号较弱,那么我们建议您使用高NA物镜,因为它们会收集更多的光。奥林巴斯的显微镜物镜种类繁多,可提供从紫外线(UV)到近红外(NIR)的荧光激发。

7.您正在使用多通道荧光成像还是一个通道?

为了补偿色度校正,可以使用不同类型的物镜:消色差,半复消色差和复消色差。消色差物镜提供的校正量最少,半消色差透镜(或萤石)具有附加的球面校正,而复消色差透镜提供最高的色差校正。

如果您的应用需要多通道荧光,那么我们建议使用Olympus UPLXAPO扩展的复消色差物镜。

8.您的观察方法是什么?

当处理太厚,太薄或双折射的样品时,研究人员将采用明视野以外的其他观察方法。常见的技术是暗场,差分干涉对比(DIC),相位对比和偏振。奥林巴斯提供了与这些不同观察方法相关的专用物镜。

如何选择合适的显微镜物镜?

9.您的样品所用的介质是什么?

如何选择合适的显微镜物镜?

许多显微镜物镜被设计为以空气为介质对标本成像,而其他显微镜物镜则使用包含较高折射率的浸没介质以实现高NA和分辨率。例如,使用浸油代替空气作为成像介质可以将分辨率提高约1.5倍。

最常见的浸入介质是空气,水,油和硅树脂。为您的物镜选择合适的介质可以提高图像质量。

10.您是否正在使用高级显微镜系统?

奥林巴斯为先进的光学系统提供专用物镜,例如共聚焦,旋转盘共聚焦,多光子激发和全内反射荧光(TIRF)显微镜。如果您使用这些系统,那么为您的应用选择正确的物镜至关重要。

本文内容摘自https://www.olympus-lifescience.com.cn/,转载请注明。

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